小C讲堂第32讲——3D细胞培养球形微孔板操作指南

       与2D培养相比，体外3D细胞培养模型被广泛认为是更具生理相关性的系统。3D模型更准确地反映了复杂的体内微环境，并已用于许多研究领域，如癌症生物学、肝毒性研究、神经生物学、胰腺研究、肾病学和干细胞生物学。这些研究改变了我们对细胞在培养和体内行为的理解。然而，由于当前技术的限制，在高通量筛选（HTS）平台中采用3D细胞培养模型的速度很慢，常见问题包括可变性增加、通量低、难以自动化以及成本高等。
　　本期，小C就给大家讲一讲如何有效改善上述问题。

　　通常，在3D培养中，我们建议使用专门的球形板，按照如下步骤操作，以确保3D培养的效果。
　　操作指南

　　制备一定浓度单细胞悬浮液。可以用新鲜培养的细胞或复苏的细胞。
　　将细胞悬液分配到孔中。这一步可以通过使用手动多通道移液器或自动液体处理系统来完成。
　　接种细胞后，盖上微孔板盖子，然后转移到培养箱中。（对于大多数哺乳动物细胞，将培养箱设置为37°C和5%CO2）。
　　使用显微镜轻松完成对细胞球体生长的日常监测。
　　根据具体的细胞系和球状生长期所需时间，可能需要换液步骤。可以通过向孔中添加新鲜培养基、或移除旧培养基并重新添加新培养基两种方式来实现。
　　可以手动或使用自动液体处理系统进行更换培养基。
　　为了使细胞球在培养基更换过程中不受干扰，应在孔的侧壁进行液体操作。
　　建议在更换培养基期间，在每个孔中保留 10至20μL的培养基。
　　6. 按照推荐的分析步骤在微孔板中分析/处理细胞球，无需将细胞球转移至其他微孔板进行检测。
　　康宁球形微孔板是专门用于3D细胞培养的多孔细胞培养板，具有不透明的壁和透明的圆形孔底。康宁的超低吸附表面涂层具有亲水性、生物惰性、不发生降解的特性，共价附着在孔底的内表面。孔底的独特设计使3D细胞球体培养物的生长具有高度可重复性。不透明侧壁和专有网格板底部设计减少了孔间串扰和背景荧光或发光。细胞球可以在同一孔板中进行培养和分析发光信号，而无需将球体转移至其他微孔板中。目前，康宁球形微孔板有96孔（货号4520和4515）和384孔（货号3830和4516）两规格。这两种型式都能够适配市面上的自动化仪器。
　　在康宁96孔球形微孔板中培养的DU145细胞球示例：

　　文章来源于康宁生命科学