原代细胞冻存-上海康朗生物

　　 原代细胞冻存​是生物医学研究中保存细胞资源、维持细胞特性的关键技术，其核心在于通过合理操作减少冰晶形成对细胞的损伤，确保复苏后细胞活性和功能。
　　一、冻存前准备
　　1.细胞准备
　　-选择处于对数生长期的原代细胞，此时细胞活性高、增殖能力强，冻存后复苏效果好。
　　-冻存前1-2天更换新鲜培养基，确保细胞状态良好，汇合度控制在70%-80%为宜。
　　2.试剂与耗材准备
　　-冻存液：常用配方为胎牛血清(FBS)80%+培养基10%+二甲基亚砜(DMSO)10%。DMSO为冻存保护剂，需提前4℃预冷；FBS需选择优质胎牛血清，提供营养支持。
　　-耗材：无菌冻存管(提前标记细胞名称、冻存日期、代数)、离心管、移液管、离心机、超净工作台。
　　-设备：程序降温盒(或异丙醇降温盒)、-80℃冰箱、液氮罐。
　　二、原代细胞冻存步骤
　　1.细胞收集
　　-吸弃培养皿中的旧培养基，用无菌PBS轻柔冲洗细胞表面2次，去除残留血清。
　　-加入适量胰蛋白酶(根据细胞类型调整浓度，通常为0.25%)，37℃孵育1-3分钟，倒置显微镜下观察，待细胞间隙增大、变圆脱落时，立即加入含血清的培养基终止消化。
　　-用移液管轻轻吹打细胞，使其成为单细胞悬液，收集至离心管中。
　　2.离心洗涤
　　-以1000-1500rpm的转速离心5-8分钟，弃上清液，得到细胞沉淀。
　　-向细胞沉淀中加入少量预冷的冻存液，轻柔吹打重悬细胞，避免产生气泡损伤细胞。
　　原代细胞冻存-上海康朗生物
　　http://www.shklsw.com/shklsw-Products-22471927/
　　https://www.chem17.com/st314776/product_22471927.html