人乙脑病毒抗体IgM（JEV IgM）Elisa试剂盒说明书

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　　使用目的：
　　本试剂盒用于测定人类血清、血浆及相关液体样本中乙脑病毒抗体IgM（JEV IgM）表达。
　　实验原理
　　本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人乙脑病毒抗体IgM（JEV IgM）表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中乙脑病毒抗体IgM（JEV IgM）相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人乙脑病毒抗体IgM（JEV IgM）的存在与否。
　　试剂盒组成
　　1
　　30倍浓缩洗涤液
　　20ml×1瓶
　　7
　　终止液
　　6ml×1瓶
　　2
　　酶标试剂
　　6ml×1瓶
　　8
　　阳性对照
　　0.5ml×1瓶
　　3
　　酶标包被板
　　12孔×8条
　　9
　　阴性对照
　　0.5ml×1瓶
　　4
　　样品稀释液
　　6ml×1瓶
　　10
　　说明书
　　1份
　　5
　　显色剂A液
　　6ml×1瓶
　　11
　　封板膜
　　2张  
　　6
　　显色剂B液
　　6ml×1/瓶
　　12
　　密封袋
　　1个
　　标本要求
　　1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
　　操作步骤
　　1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
　　2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
　　3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
　　4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。
　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
　　7. 温育：操作同3。
　　8. 洗涤：操作同5。
　　9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
　　10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
　　11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
　　计算和结果判定：
　　 试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20
　　  临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
　　  阴性判定：样品OD值 临界值（CUT OFF）者为乙脑病毒抗体IgM（JEV IgM）阴性
　　  阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为乙脑病毒抗体IgM（JEV IgM）阳性。
　　注意事项
　　1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
　　2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
　　3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
　　4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
　　5．底物请避光保存。
　　6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
　　7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。
　　保存条件及有效期
　　1．试剂盒保存：；2-8℃。
　　2．有效期：6个月

先码住，后续升级改造拿来参考。