Morris水迷宫对卵巢切除大鼠学习与记忆的影响

       60～90s来寻找隐藏的站台。如果成功地找到站台，鼠可以得到在站台上的10～30s休息时间；如果60～90s内未能成功的找到站台，就由实验人员将鼠人工置于站台上，且同样给予10～30s的休息时间。有时鼠可能会在10～30s间隔时间到达之前从站台上掉下或跳入水中继续游泳。一旦这种情况发生，则将鼠重新放回站台，并重新计时，使时间间隔到达（10～30s）。这样可以确保每只鼠在每次实验后有相等的时间来观察和获取空间信息。　材料和方法 材料 ①动物 : 雌性 SD 大鼠 40 只 ( 第四军医大学实验动物中心) , 体质量 180 ～200 g. 饲养温度22 ℃,12 h 光照 ,12 h 黑暗 ,允许自由饮水和摄食 ; ②** : 17 &beta; 2 雌二醇 ( 17 2 &beta;estradiol , E2) : 美国 Sigma 公司生产 ; GST :第四军医大学**研究所 , 药品批号 :20010110. 乙酰脂酶 ( Ache) 试剂盒由南京建成生物工程研究所提供. 其他试剂为国产分析纯试剂.　方法　动物分组制模 随机分为 5 组 ,每组 8 只 : 假去势组 ( Sham 组) ; 去势组 ( 卵巢切除术组 , ovariecto2my , OVX) ; OVX + E 2 组 ; GST 高剂量组 ( OVX +GST 2 h) ; GST 低剂量两组 ( OVX + GST 2 L ) . 适应性饲养 5 d 后开始实验. 全部大鼠在速眠新 ( 0. 3～0. 8mL/ kg) 腹腔注射麻醉下行手术 , 假去势组在开腹后去除卵巢周围的脂肪组织后关腹 ; 其余各组行双侧OVX.　给**法 术后 1 wk 开始灌胃给药. 根据每日**处理剂量分为 5 组 : 假去势组 ( Sham 组 , 生理盐水 5 mL/ kg) ,OVX 组 (生理盐水 5 mL/ kg) ,OVX+ E 2 组(400&mu; g/ d , E 2) ,OVX + GST 2h 组(50 mg/ kg) ,OVX + GST 2 L 组(25 mg/ kg) . 连续用药 5 wk.　行为学测试　实验条件与仪器 水池直径约深约 预先在水池内注入清水 , 然后加入少许墨汁 ,使水变成不透明的灰色 , 再注入清水使水面高出平台 2 cm ,水温控制在 22 ℃ . 以沿水池边缘相等分布的 4 个点作为起始点 ,这样水池被分为 4个相同的象限 ( 四分之一圆) ,平台位于某个象限的中间 ,在其他 3 个象限任选一个入水点. 实验每日 2次 ,第 2 日的入水点与前一日采用不同的入水点 , 每次训练 120 s. 若大鼠在 120 s 内尚未找到平台 ,则将大鼠拿到平台上并使它在上面停留 30 s ; 若大鼠在120 s 内找到平台 ,也让其在平台上停留 30 s ,这样才结束一次训练. 采用北京杰日欧科技有限公司研制的 Morris 水迷宫检测软件系统自动跟踪池内大鼠的活动轨迹并记录大鼠游泳时间、游泳速度及游泳距离等参数.　结果评价 当测试软件设定的训练时间已到或大鼠已经爬上平台 ,计算机停止跟踪并记录下游泳轨迹和自动计算出大鼠在水池中所游过的路程 ,找到平台时所需的时间即潜伏期. 我们以大鼠入水后找到平台的游泳时间即逃避潜伏期 ( escape latency ,EL ) ,作为观测指标. 120 s 内未找到平台的记为 120s. 连续训练 5 d ,第 6 日撤除平台 , 进行空间探索实验 ,在原平台象限的对侧象限入水 ,记录游泳轨迹. Ache 活性测定　组织样本的处理 大鼠结束 Morris 水迷宫试验后次日断头处死 ,在冰浴上迅速剥离大脑皮层和海马 ,准确称取皮层和海马 ,加入预冷的生理盐水 ,在冰浴中用匀浆器将脑组织匀浆 , 制成 10 g/ L 的组织匀浆 ,组织匀浆经 4000 r/ min , 4 ℃离心 20 min ,取上清液 ,移入 E ppendorf 管 , - 70 ℃保存待测.Morris水迷宫对卵巢切除大鼠学习与记忆的影响 Ache 的活性测定 参照试剂盒提供的试剂及方法进行操作. 应用 722 型紫外线分光光度仪.　蛋白测定 采用 Bradfordf 法.统计学处理 数据用 x &plusmn; s 表示 ,采用 SPSS 10. 0软件进行统计分析 ,所用统计方法为单因素方差分析及重复测量资料方差分析.　结果　去除卵巢对大鼠空间学习记忆的影响及 GST和雌**的作用　各组大鼠 5 d 训练中潜伏期的变化 各实验组随着训练次数的增加 ,每组平均逃避潜伏期在不断缩短 , 但各实验组间的逃避潜伏期无显著性差异( P > 0. 05 , Tab 1) .　空间探索实验结果 撤除平台后 , 大鼠在原平台象限的对侧象限入水 , 记录 120 s 的游泳轨迹 ,分析大鼠在原平台象限的记忆频度及找到原平台位置的游泳时间既逃避潜伏期 ,以此反映大鼠的空间记忆能力. 从 Tab 2 中可以看出 ,撤除平台后 ,OVX 组大鼠游泳逃避潜伏期较 Sham 组较明显延长 ( P 其记忆频度也较 Sham 组降低 ( P 雌**组逃避潜伏期及记忆频度较 OVX 组有显著的变化 ; GST 组逃避潜伏期也较 OVX 组缩短 , 而记忆频度也明显增加 ( GST 2 L 组 , P <span style="font-family: '宋体'; font-size: 10.5pt;