钰博生物文献：硒缺乏雏鸡肠粘膜差异蛋白的筛选验证及信号通路研究

       硒缺乏雏鸡肠粘膜差异蛋白的筛选验证及信号通路研究
　　  刘哲 黑龙江八一农垦大学 摘要：硒是人和动物体内重要的微量元素之一。硒缺乏导致幼龄动物腹泻,腹泻与肠粘膜免疫密切相关,而硒如何调控肠粘膜免疫尚不清楚。为了研究硒缺乏对雏鸡肠粘膜影响的分子机制,我们假设通过缺硒降低雏鸡十二指肠粘膜的抗氧化活性,增加核因子抑制剂激酶α(IKKα)的活性,并激活NF-κB通路,从而减弱免疫功能。本试验选择SPF雏鸡为试验动物,建立硒缺乏雏鸡模型,运用同位素标记相对和定量-质谱联用技术(i TRAQ-LCMS/MS)定量鉴定硒缺乏雏鸡十二指肠粘膜差异蛋白质组。并使用生物信息学方法进行通路富集分析寻找差异代谢通路。采用Western Blot法验证十二指肠粘膜差异蛋白DNA拓扑异构酶β(TOPIIIβ)、蛋白激酶(PTK)、/激酶(AKT2),并分析NF-κB信号通路相关蛋白,P50,IKKα和双特异性促分裂原活化蛋白激酶(MEK2)。通过实时定量PCR(RT-Q-PCR)检测十二指肠粘膜差异蛋白TOPIIIβ、AKT2、PTK等m RNA的表达量。采用ELISA酶联免疫吸附法测定各段肠粘膜的分泌型免疫球蛋白A(SIg A)、十二指肠粘膜的氧化型(GSSG),(GSH)和过氧化物酶(GPx)的活性,并检测十二指肠粘膜的P65、NF-κB p65 DNA结合、p-IκB和IκB及炎性因子的活性。试验结果表明:1.与对照组相比,硒缺乏组血液及十二指肠粘膜组织中硒含量第7 d、21 d和35 d均降低,其中第7 d显著降低(p1.2,或