八臂迷宫对阿尔茨海默病炎症模型大鼠神经细胞的保护作用

       :用脂多糖( lipopolysaccharide，LPS) 建立阿尔茨海默病( Alzheimer's disease，AD) 炎症模型大鼠，观察淫羊藿苷( Icariin ICA) 对该模型大鼠学习记忆及超微结构的影响。方法: 经八臂迷宫训练成功的 45 只雄性 Wistar 大鼠随机分为对照组、模型组、淫羊藿苷 30mg/kg 组、淫羊藿苷 120mg/kg 组、双氯芬酸组10mg/kg 组，采用侧脑室注射 LPS( 10制作实验性 AD 炎症模型，并八臂迷宫测验并记录其数据。迷宫测验完成后断头取脑海马组织。应用电镜观察大鼠海马组织CA1 区神经细胞超微结构变化，用 SPSS 统计学软件进行统计学分析。结果: ⑴侧脑室注射 LPS( 10后对大鼠一般情况观察出现了行为异常。⑵八臂迷宫测试系统分析结果: 制模后与对照组相比，其它各组大鼠总记忆错误( TE) 、参考记忆错误( ＲME) 、工作记忆错误( WME) 明显增多，用淫羊藿苷**后与模型组比较，淫羊藿苷 120mg/kg 组和双氯芬酸组 10mg/kg 组大鼠的 TE、ＲME、WME 均明显减少，淫羊藿苷 30mg/kg组错误选择次数无统计学意义。超微结构观察示: 对照组、海马组织线粒体比较规则，淫羊藿苷 120mg/kg 组、双氯芬酸组线粒体轻度受损，模型组海马神经细胞核固缩，核周隙扩张，甚至核膜结构不清，核形态极不规则。结论: 侧脑室注射LPS( 10能成功复制AD 炎症动物模型; 淫羊藿苷 120mg / kg 组显著改善 AD 模型大鼠的学习记忆能力，淫羊藿苷对炎症模型大鼠海马超微结构有保护作用。; 阿尔茨海默病炎症模型; 电子显微镜; 超微结构，AD) 是一种常见的**神经系统退行性**，表现为进行性的记忆和认知功能的下降，行为异常和社交障碍。其发病机制有很多学说，其中炎症机制受到广泛关注。众多研究表明****是**阿尔茨海默病的一种潜在**方案并研究提示**可改善 AD 病理改变。应用脂多糖可诱导阿尔茨海默病炎症模型大鼠模型。淫羊藿甙具有**，抗氧化等多种生物学活性。基于以上理论，联系阿尔茨海默病的炎症机制和淫羊藿的**作用本实验目的是建立脂多糖诱导的 AD 炎症模型大鼠，通过八臂迷宫测验淫羊藿苷对该模型大鼠学习记忆能力的影响，用电镜观察海马组织 CA1 区的超微结构并探讨及其作用机制。材料与方法1 试验** 淫羊藿苷 ( ICA) 西安小草植物科技有限责任公司，批号: XC071223，纯度 ＞98% ( HPLC) 。2 动物 普通成年雄性 Wistar 大鼠 45 只，体重 220 ～ 280g，购自内蒙古大学实验动物中心，均为清洁级动物，动物合格证号为: SCXK( 蒙) 2002-0001 ，分组分笼饲养，充分光照，每 12 小时明暗交替，( 光照时间: 8～20控制室温 18-2180%～ 85% 。适应性喂养 3 天。3 试剂 脂多糖 ( LPS) 美国 SIGMA 公司，批号: 127K4048货号: L2880。4 仪器 八臂迷宫分析测试系统( ，脑立体定位仪( ，H-600 型透视电镜( 日本株式会社产品)5 方法 八臂迷宫动物空间记忆测试是研究认知功能机制的*常用方法之一，本研究也采用放射状八臂迷宫( 四臂放食物) 训练 Wistar 大鼠，以建立一种有效评价淫羊藿对大鼠空间记忆影响。在进行放射状八臂迷宫实验前限制大鼠禁食，不限制饮水，维持其体重原体重的 80% ～ 85%。行为学观察均在10～ 17进行。训练前大鼠先在迷宫中适应 2 d，每天2 次。适应时 3 ～ 4 只大鼠同时置于迷宫中，自由活动和摄取食物 10 min。适应后进行每天 2 次的训练。每次训练中，八臂中只有四臂放置了食物( 分别为 1、3、4 和 6 号臂) ，整个实验过程均维持此顺序。大鼠放在迷宫区，此时区四周用门关住 15 s 将门打开，大鼠可选择进入任意一臂摄取食物，测试定时3 分钟。大鼠进入有食物的臂且摄取了食物为 1 次正确选淫羊藿苷对阿尔茨海默病炎症模型大鼠神经细胞的保护作用，WME) ，进入不放食物臂称为参考记忆错误( reference memory error，ＲME) 。两者之和为总记忆错误( total error，TE) 。连续 5 次训练总错误选择次数为1 次或1 次以下，认为训练成功。ＲM-200 八臂迷宫分析测试系统采用红外探测的方式跟踪大鼠的行为，采用微电脑控制，可自动得出测定结果。八臂迷宫训练成功的 Wistar 大鼠 45 只随机分为 5 组，分别为对照组、模型组、淫羊藿苷 30mg/kg 组、淫羊藿苷 120mg / kg 组、 10mg / kg 组，每组淫羊藿苷对阿尔茨海默病炎症模型大鼠神经细胞的保护作用大鼠 9 只。大鼠八臂迷宫训练成功后次日通过侧脑室注射 LPS 溶液诱导 AD 炎症模型，具体方法如下: 3% ****钠40 ～ 50mg / kg 腹腔注射，麻醉大鼠，将鼠头固定于脑立体定位仪上保持前后囱在同一水平，剪开头顶部毛发，**后切开皮肤，按照 George Paxinos《大鼠脑立体定位图谱》进行定位，选择右侧侧脑室为注射靶区在前囱点后方 1． 0 mm，中线旁开 1．6mm，用柔性钻一小孔，用微量注射器缓慢自脑表面垂直进针深度为 3． 4mm( 达侧脑室) ，将 5ug/ul LPS 溶液 10缓慢注入，留针 2min 后缓慢撤针，缝合切口。对照组注入等体积无菌性生理盐水。造模后**天始用药结束止分别通过八臂迷宫实验观察大鼠的空间记忆能力，以判定模型的成败和**的疗效。八臂迷宫测试系统记录分析大鼠的 ＲME 、WME、TE 每只大鼠测试两次，取平均值进行统计分析。5． 1 给**法大鼠侧脑室注射生理盐水后次日起，蒸馏水连续灌胃 14 天，方法为用灌胃针将蒸馏水按 1ml/100g( 大鼠体重) 灌入大鼠胃内，1 次 / d; AD 模型组: 大鼠 AD 模型制备后次日起，蒸馏水连续灌胃 14 天，方法同上，1 次/d; 淫羊藿苷 30mg/kg 组: 大鼠 AD 模型制备后次日起淫羊藿苷30mg / kg，连续灌胃 14 天，方法为用灌胃针将淫羊藿苷混悬液( 配制 ICA 浓度为 0． 3%) 1ml/100g 灌入大鼠胃内，1 次/d; 淫羊藿苷 120mg/kg 组: 大鼠 AD 模型制备后次日起，淫羊藿苷120mg / kg 连续灌胃 14 天，方法同上，1 次 / d; 双氯芬酸组: 大鼠AD 模型制备后次日起，( 配制浓度为 0．1% ) 10mg / kg 连续灌胃 14 天，方法同上，1 次 / d; 给药剂量参照人的给药剂量，按体重、体形系数算出。八臂迷宫测试完成后 24h 内用 2% ****钠腹腔麻醉( 40 ～50mg/kg) 快速取脑后分离海马组织，液氮保存。5． 2 电镜标本的制作及大鼠海马超微结构的观察 每组随机选取 3 只大鼠，10% 麻醉后，快速取脑，并将取出的脑组织置于冰上，分离海马，3% 戊二醛中 4CA1 区富含神经元部位制成超薄切片( 70nm) ; 经醋酸铀电子染色剂染色后置于透射电镜下观察并拍照。淫羊藿苷对阿尔茨海默病炎症模型大鼠神经细胞的保护作用6 统计学处理 采用 SPSS 13． 0 统计软件进行统计分析。描述性资料以( x ± s) 表示，计量资料经齐性检验方差齐采用单因素方差分析，组间比较用 LSD 法，检验水准 a =0． 05。结果1 一般情况观察 模型组与其它组比较，大鼠活动减少，体毛少泽，神情呆滞，反应欠灵，食欲减退。2 八臂迷宫实验结果120mg/kg 组和双氯芬酸组总记忆错误、参考记忆错误、工作记忆错误显著减少，淫羊藿苷 30mg/kg 组总记忆错误、参考记忆错误、工作记忆错误无统计学意义，淫羊藿苷 120mg/kg 组和双氯芬酸组比较总记忆错误、参考记忆错误、工作记忆错误无统计学意义。3 电镜观察海马超微结构结果 对照组大鼠海马区神经细胞线粒体规则，核呈圆形或椭圆形，核膜双层结构清晰，核内染色质分布均匀，可见核孔、单个或两个核仁，细胞质内含各种细胞器及包涵物、排列有序。线粒体大小及形态正常，内嵴清晰可见，基质均匀，粗面内质网散在分布，神经毡内突触结构正常。见图 1，2。淫羊藿苷 30mg/kg 组神经细胞损伤较重，线粒体嵴断裂，呈空泡化改变，胞质内可见脂褐素颗粒沉积，但核膜清楚，见图 3，4 。模型组可见大鼠海马 CAI 区神经细胞严重损伤，稀疏少见，神经细胞形态不规则，变形，胞膜皱缩，胞体缩小，胞浆浓缩，细胞器稀疏，线粒体数目明显减少，线粒体靖排列紊乱，甚至断裂消失，神经细胞核固缩，核膜结构不清，核形态不规则，有切迹，核偏位，线粒体肿胀，可见嵴断裂，空泡形成。见图 5，6。淫羊藿苷 120mg/kg 组大鼠海马内神经细胞损伤较轻，为神经元胞体较大，核圆，核膜清晰，核仁明显; 胞质内细胞器较丰富; 排列有序，神经毡内突起结构正常，突触数量较多。见图 7，8。双氯芬酸组大鼠海马内结构基本正常，突触前膜内突触小泡较清晰 ，神经细胞内细胞器较多，排列较整齐。

这个案例很有借鉴意义，谢谢。