人抗核糖体抗体（ANA）酶联免疫分析试剂盒使用说明

       本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 4 ng/L -120 ng/L 上海远慕ELISA试剂盒供应商！ 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗核糖体抗体(ANA)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗核糖体抗体(ANA)水平。用纯化的人核糖体抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入抗核糖体抗体(ANA)，再与HRP标记的核糖体抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗核糖体抗体(ANA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗核糖体抗体(ANA)浓度。
　　试剂盒组成
　　1
　　30倍浓缩洗涤液
　　20ml×1瓶
　　7
　　终止液
　　6ml×1瓶
　　2
　　酶标试剂
　　6ml×1瓶
　　8
　　标准品（240 ng/L）
　　0.5ml×1瓶
　　3
　　酶标包被板
　　12孔×8条
　　9
　　标准品稀释液
　　1.5ml×1瓶
　　4
　　样品稀释液
　　6ml×1瓶
　　10
　　说明书
　　1份
　　5
　　显色剂A液
　　6ml×1瓶
　　11
　　封板膜
　　2张
　　6
　　显色剂B液
　　6ml×1/瓶
　　12
　　密封袋
　　1个
　　标本要求
　　1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
　　2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
　　操作步骤
　　1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
　　120 ng/L
　　5号标准品
　　150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
　　60 ng/L
　　4号标准品
　　150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
　　30 ng/L
　　3号标准品
　　150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
　　15 ng/L
　　2号标准品
　　150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
　　7.5 ng/L
　　1号标准品
　　150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
　　2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 1.准备试剂，样品和标准品 2.加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟 3.洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟 4.洗板5次，加入显色液A、B，37℃反应10分钟 5.加入终止液 6.15分钟之内度OD值 7.计算 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
　　注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
　　保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6个月

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