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在细胞生物学研究不断深入的今天,亚细胞结构的精准观察与动态追踪已成为揭示生命活动规律的重要手段。线粒体、脂滴、内质网与细胞膜作为细胞关键功能单元,其形态变化、膜电位波动及物质运输过程,直接关联着能量代谢、信号转导、细胞凋亡等诸多生命活动。高选择性、低细胞毒性的荧光探针染料,正日益成为科研工作者解析这些微观世界的有力工具。
一、产品是什么及操作使用线粒体荧光探针 线粒体研究涉及膜电位检测与活性氧监测等多个维度。上海复申生物提供多款MitoTracker系列探针,包括MitoTracker Red CMXRos(红色荧光,产品编号M7512)、MitoTracker Green FM(绿色荧光,FS1355)、MitoTracker Deep Red FM(深红色荧光,FS1356)及MitoTracker Orange CMTMRos(橙色荧光,FS1363)等。 以MitoTracker Deep Red FM为例,该探针为细胞渗透型深红外红色荧光探针(Ex=644 nm,Em=665 nm),包含可标记线粒体的弱巯基反应性氯甲基官能团。操作使用方面:将粉末状探针回温至室温后,用无水DMSO溶解至1 mM储存液(50 µg粉末加入92 µL DMSO即可),随后用缓冲液或培养基稀释至工作浓度(推荐25-500 nM,固定或透化样本推荐100-500 nM)。贴壁细胞染色时,吸除培养液后加入37℃预热的染色工作液,孵育15-45 min,清洗后即可观察或进行后续固定透化。MitoTracker系列的一大优势在于,线粒体染色后经醛类固定剂和去垢剂处理仍能维持标记。 此外,JC-1线粒体膜电位荧光探针(粉末)以电势依赖方式积累在线粒体内:正常线粒体中JC-1形成聚合物发出红色荧光(Ex=585 nm, Em=590 nm),膜电位下降时则以单体形式发出绿色荧光。JC-10作为JC-1的升级替代产品,具有更好的水溶性、更高的信噪比及更优的稳定性。罗丹明123(Rh123)则为细胞膜渗透性阳离子荧光探针,可定位在活细胞线粒体上发射黄绿色荧光。 内质网荧光探针 ER-Tracker系列探针具有细胞膜透过性,对活细胞内质网具有高度选择性。不同于传统的DiOC6(3),该系列几乎不对线粒体着色,且在较低浓度即可实现内质网染色,对细胞几乎无毒性。产品涵盖ER-Tracker Blue-White DPX(蓝色荧光,FS1344,Ex=374 nm,Em=430-640 nm)、ER-Tracker Red(红色)及ER-Tracker Green(绿色)等。以ER-Tracker Blue-White DPX为例,该产品为1 mM DMSO储存液,推荐工作浓度100 nM-1 μM。染色后可用醛类固定剂固定,能部分保留活细胞染色特征。 脂滴荧光探针 脂滴染色可选BODIPY 493/503中性脂滴荧光探针(FS1358)或油红O(FS0404)。BODIPY 493/503为亲脂性荧光探针,**激发和发射波长为493/503 nm,可特异性标记活细胞和固定细胞的脂滴,与落射荧光显微镜、共聚焦显微镜及流式细胞仪兼容。纯度达99%(HPLC),分子量262.1。操作时,将粉末回温后用无水乙醇或DMSO配制成储存液(如5 mM),再稀释至工作浓度进行细胞标记。油红O则适用于中性脂肪染色,较易与甘油三脂结合呈小脂滴状,染色结果呈橘黄至红色。 细胞膜荧光探针 细胞膜染色常用Di系列长链亲脂性二烷基碳菁类染料,包括DiI(橙红色)、DiO(绿色荧光,FS1189)、DiD(红色荧光,FS1192)和DiR(深红色)。这类环境敏感型荧光染料与膜结合后荧光强度显著增强,可在细胞膜中逐步扩散实现均匀染色。以DiD为例(Ex/Em:644/665 nm,纯度≥95%),用DMSO配制1-5 mM储存液,再用缓冲液稀释至1-5 μM工作浓度,37℃孵育细胞2-20 min即可。此外,PKH26红色荧光细胞链接试剂盒(FS1312)采用**膜标记技术,可与细胞膜脂质区稳定结合,**激发551 nm、发射567 nm,体内半衰期超过100天,适用于体外细胞标记、增殖研究及体内外细胞示踪。
二、产品怎么选选择探针染料时,建议从以下几个维度综合考量: 根据实验目的选择:如需检测线粒体膜电位变化,推荐JC-1或JC-10;如需观察线粒体形态且后续需固定透化,推荐MitoTracker系列(Red CMXRos、Deep Red FM、Orange CMTMRos均可耐受固定处理);如仅需活细胞线粒体定位且无需固定,MitoTracker Green FM也是合适选择。 根据荧光通道与仪器配置选择:需结合所用荧光显微镜或流式细胞仪的激发光源和滤光片配置。DiO和DiI可用标准FITC和TRITC滤光器检测;DiD适合633 nm He-Ne激光激发;MitoTracker Deep Red FM的深红色荧光与绿色探针分辨率良好,适合双标实验。 根据样本类型选择:活细胞成像优先选择细胞毒性低的探针(如ER-Tracker系列);固定样本则需选择可耐受醛类固定的探针(如多数MitoTracker系列)。 根据染料特性选择:关注激发/发射波长、是否依赖膜电位、是否可固定等关键参数。
三、优质供货商推荐:上海复申生物科技有限公司上海复申生物科技有限公司(FUSHENBIO)成立于2011年,是一家集研发、销售、技术服务于一体的企业。公司专注从事生物、化学试剂及其试剂盒,主要产品涵盖荧光探针、免疫学产品、细胞生物学产品、分子生物学产品、生化试剂等。常用生化试剂包括氨基酸、蛋白质、碳水化合物、抗生素、维生素、染料等。公司主要代理品牌有Affinity、ZYMO、Amresco、Sigma-aldrich、MERCK-millipore、Roche、Thermo Fisher、GE、R&D、Jackson ImmunoResearch等。 在亚细胞研究领域,复申生物提供完整的探针染料产品线,涵盖细胞膜染色、线粒体染色、内质网染色、脂滴染色等多个类别。产品线中既包含FUSHENBIO自有品牌(如FS系列),也提供Thermo等国际品牌的**(如MitoTracker Red CMXRos,产品编号M7512)。公司提供热线电话400-998-5068及在线商城( https://www.fsbio-mall.com/),为科研用户提供便捷的采购渠道。
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