细胞线粒体分离试剂盒使用说明书

       细胞线粒体分离试剂盒使用说明书
　　上海远慕生物详细为您介绍细胞线粒体分离试剂盒的注意事项，用途，操作步骤，规格及其他咨讯，本司专业出售ELISA试剂盒，培养基，抗体，抗原，抗生素，维生素，动物血清血浆，标准品对照品，溶液，化学试剂，生化试剂，染色液，缓冲液，生物分子，微生物，实验耗材，氨基酸，细胞株，其他实验试剂等，订购！
　　中文名：细胞线粒体分离试剂盒
　　供应商：上海远慕
　　规格：50T
　　分类：细胞组分分离
　　保存：—20℃,12个月
　　说明：快速分离动物硬组织(如骨骼肌)中的线粒体的试剂盒
　　用途：分离线粒体的同时可以获得去除线粒体的细胞浆蛋白,可用于分析等线粒体蛋白向胞浆的释放,大部分获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜,并具有线粒体的生理功能(如检测线粒体膜电位),获得的蛋白可用于SDS-PAGE、Western、双向电泳等蛋白分析。
　　适用范围：限于科研实验，不作临床

　　细胞线粒体分离试剂盒使用说明：
　　1、如果不是用于制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中不必加入PMSF。
　　2、如果用于制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中需添加PMSF。PMSF一定要在线粒体分离试剂或线粒体裂解液加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。
　　3、如果不是用于制备线粒体蛋白，Mitochondria Lysis buffer和Wash buffer中不必加入PMSF。如果用于制备线粒体蛋白样品，Mitochondria Lysis buffer和Wash buffer中需添加PMSF。
　　细胞线粒体分离试剂盒作用：
　　1、本试剂盒分离获得的线粒体纯度较高，并且绝大部分分离获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能。因此本试剂盒分离得到的线粒体可以用于线粒体的生理功能等方面的研究。
　　2、本试剂盒分离得到的线粒体也可以被试剂盒中的线粒体裂解液或其它适当裂解液裂解后用于SDS-PAGE、Western、双向电泳等蛋白分析。
　　3、本试剂盒提供了线粒体制备过程中匀浆程度的重要判断指标，即台盼蓝染色，使分离得到的线粒体的质量更加有保证。台盼蓝染色液为选用试剂，在实验条件成熟后可以不必使用。
　　4、本试剂盒提供了蛋白酶抑制剂PMSF，使匀浆时蛋白酶的活性被适当抑制，这样在获得线粒体的同时还可以获得有时有用的去除了大量线粒体的蛋白，在进行蛋白或酶活分析时可以作为对照。 如果每个样品的细胞数量为2000-5000万，本试剂盒可以处理50-100个样品。
　　5、本试剂盒提供台盼蓝染色液和PMSF，可以分别判断线粒体质量和提取细胞浆蛋白。
　　细胞线粒体分离试剂盒实验步骤：
　　1，清洗：用预冷的PBS清洗细胞，离心，其上清。
　　2，裂解：沉淀用预冷的Mitochondria Lysis buffer重悬细胞，冰浴放置，可用相差显微镜检测膨胀的程度。
　　3，匀浆：把细胞悬液转移至Dounce匀浆器中，匀浆10～20次。不同细胞或不同匀浆器所需的匀浆次数有所不同，需自行优化。
　　4，台盼蓝染色(可选)：取约细胞匀浆液，加入30～50μl Trypan Blue Stain，混匀，显微镜观察台盼蓝染色阳性(蓝色)细胞的比例，如果阳性细胞比例不足50%，增加5次匀浆。
　　5，立即取匀浆液，加入等量Wash buffer，轻轻颠倒混匀数次。
　　6，离心以去除细胞核、未破碎的细胞和大的膜碎片。
　　7，上清液转移至一干净离心管，离心。
　　8，弃上清，沉淀为线粒体，如果希望获得去除线粒体的细胞浆蛋白，应在本步骤中收集上清，并且在收集上清时注意勿触及沉淀。
　　9，保存：弃上清，用适当缓冲液悬浮沉淀。
　　细胞线粒体分离试剂盒优点：
　　1，专一性强
　　2，灵敏度高
　　3，样品易保存
　　4，结果易观察
　　5，可以定量测定
　　6，可以大规模测定样品
　　7，仪器和试剂简单
　　细胞线粒体分离试剂盒注意事项：
　　1，分离线粒体的所有步骤均需在冰上或4℃进行，所用溶液需冰浴或4℃预冷！全部操作 时间尽量控制在1h以内；
　　2，通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取600g和11,000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可以采用1000g和3500g；
　　3，避免直接接触终止液和底物。如不小心接触到这些液体，请尽快用水冲洗；
　　4，台盼蓝与PMSF对人体有毒，请注意小心防护；
　　5，实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品；
　　6，试剂对于不同实验不必全部使用，在实验条件成熟后可以不必使用；
　　7，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
　　8，本试剂盒请远离儿童；
　　9，不要用嘴接触试剂盒里的任何成份。
　　标签：细胞线粒体分离试剂盒