利用血管紧张素I的提取比较传统SPE柱与磁性萃取剂的性能
利用血管紧张素I的提取比较传统SPE柱与磁性萃取剂的性能关键词
血管紧张素I，液相色谱质谱，固相萃取，Angiotensin I，Ang I，Renin，LC-MS/MS，SPE
前言
血管紧张素I（Ang I）是较为常见的临检标志物之一，通过对血管紧张素I提取效果的测试，能够有效地评价各种样品前处理手段的临床适用性和技术性能。
本文通过对比市售的某进口品牌HLB 96位SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取剂提取Ang I试验的各项方法学指标，直观地比较了两者的性能表现。也为临床SPE样品前处理技术的发展前景提供了非常有价值的参考。
实验设计
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如上表所示，使用1% BSA制备四个浓度水平的Ang I系列标准溶液，辅以稳定同位素标记的Ang I内标。
设定如下条件的SPE，应用于某进口品牌HLB 96位SPE多孔板。使用适配的正压96孔SPE操作装置运行样品。
步骤
名称
操作
1
活化
使用500 μL甲醇活化SPE板两次
2
平衡
使用500 μL5%甲酸水溶液活化SPE板两次
3
上样
取500 μL LOQ、低（L）、中（M）、高（H）上样
4
淋洗1
使用500 μL5%甲酸水溶液淋洗SPE板两次
5
淋洗2
使用500 μL20%甲醇水溶液淋洗SPE板两次
6
洗脱
每孔各加入250 μL甲醇，收集洗脱液于96孔板中
与此对应的，为AUTO M32全自动萃取仪设定如下的程序运行样品，每个样品使用2mg HLB磁性萃取剂。
指令
溶液
孔位
溶剂量（μL）
活化
甲醇
1
500
平衡
5%甲酸水溶液
2
500
上样
样品溶液
3
500
淋洗1
5%甲酸水溶液
4
500
淋洗2
20%甲醇水溶液
5
500
洗脱
甲醇
6
250
排废
/
2
600
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某进口品牌HLB96位SPE多孔板
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AUTO M32全自动萃取仪
数据和比较
将实验设计中所述的四个标准样本，每个样品重复三次提取，比较两种前处理方法提取后，在LC-MS/MS上测得的相对标准偏差，结果如下图所示。其中，左侧蓝色柱为使用某进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后的测定结果，右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。
http://img71.mtnets.com/5/20220426/637865666793461506110.png http://img71.mtnets.com/5/20220426/637865666795801536545.png http://img71.mtnets.com/5/20220426/637865666797985564786.png http://img71.mtnets.com/5/20220426/637865666800325594883.png
可以看到，两种前处理方法无论在外表峰面积、内标峰面积、计算浓度上的相对标准偏差均没有显著的差别，但是磁性萃取剂的结果在大多数水平下都略好于传统的96位SPE多孔板。
在提取率的比较中，我们选择某进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后测得的峰面积为基准（99%），以磁性萃取剂提取后测得的峰面积与之比较。如下图所示，左侧蓝色柱为使用某进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后的测定结果，右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。
http://img71.mtnets.com/5/20220426/637865666802977628856.png
可以看到，在所有浓度水平下，磁性萃取剂提取测得峰面积均显著地好于传统的96位SPE多孔板，且均超过后者50%以上，甚至达到了约1.8倍。
最后如下图展示的LOQ水平两种方法提取后，在LC-MS/MS所得的MRM色谱图。图a为使用传统的96位SPE多孔板所得色谱图，图b为磁性萃取剂所得色谱图。
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明显地，在LOQ水平下，磁性萃取剂提取得到的色谱峰高超过了传统的96位SPE多孔板提取，这与提取率结果是一致的。
结果讨论
通过上述数据比较，我们可以得到如下表所述的结果。
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可以看到，在以上评价范围内，磁性萃取剂的提取效果均优于某进口品牌的HLB 96位SPE多孔板。同时，AUTO M32全自动提取仪固有的“一次移液”和“无人值守”操作模式，降低了样品前处理中的人为参与，同时大幅提高了自动化水平。
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